河北细胞冻存管常用指南 苏州陶迈森分析仪器

注意事项：从原理上讲，所有菌都可用瓷珠菌保存管保存。菌保存的原理是DNA-copy时自发突变导致菌退化，因此要创造代谢不活泼的状态，干燥、低温、缺氧、缺营养的环境，创造的环境越接近此状态，所保存的菌的时间就越长。但需要注意的是，由于苛刻菌(如流行感嗜血杆l菌、脑l膜炎萘瑟氏菌)等特殊细菌保存时，需-80℃或更低温度保存，才可以做到更长期的保存。

这种因细胞内部结冰而致的细胞损伤即就是冰晶损伤(Intracellular ice damage)。冰晶损伤是由冷却速度过快造成，冷却速度越快，冰晶损伤越大。同时随着温度的下降,细胞外部的水分会先结冰，从而使得未结冰的溶液中电解质浓度升高，细胞膜上的脂质会因长时问暴露在高溶质的溶液中而受到损坏，细胞发生渗漏，导致在复温时大量水分渗入细胞内造成细胞死l亡。这种因保存溶液溶质浓度升高而致的细胞损伤被称为溶液损伤(Solution damage)。溶液损伤是由冷却速度过慢，使细胞在高浓度的溶液中暴露的时间过长而造成，冷却速度越慢，此损伤越严重。

主要技术——冻存技术：1.液氮法：目前，细胞冻存尤为常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成。采用甘油或二甲l基亚砜作保护剂，这两种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高细胞膜对水的通透性，且对细胞无明显毒性。